منتدى علوم المنصورة
تقنية الPCR Ezlb9t10


منتدى علوم المنصورة
تقنية الPCR Ezlb9t10

منتدى علوم المنصورة
هل تريد التفاعل مع هذه المساهمة؟ كل ما عليك هو إنشاء حساب جديد ببضع خطوات أو تسجيل الدخول للمتابعة.

منتدى علوم المنصورةدخول

اهلا بك يا زائر لديك 16777214 مساهمة


descriptionتقنية الPCR Emptyتقنية الPCR

more_horiz
تقنية PCR
Polymerase Chain Reaction
تفاعل البليمريز التتابعي





تحفظ المعلومات الوراثية و انتاج المواد لصنع الخلايا و الحفاظ عليها في داخل الحمض النووي (DNA ) . و تقوم الخلية بمضاعفة كمية الحمض النووي وقت انقسام الخلية بشكل تلقائي و بشكل سريع مع وجود نظام تصحيح للأخطاء خلال النسخ. . و تبلغ سرعة النسخ والمضاعفة إلى 1000 قاعدة نيتروجينية بالثانية ( داخل النظام الحيوي ) و هي كما ذكرنا تحدث في الخلية في وقت التكاثر والانقسام فقط .

ومع التطور في مجال التكنولوجيا الحيوية والذي يقوم على التعامل مع الحمض النووي (DNA ) بشكل أساسي ، استدعى ذلك العلماء على أن يبحثوا عن طريقة أو تقنية تقوم على مضاعفة كمية الحمض النووي (DNA ) بشكل كبير ، فكان هناك عدة محاولات لتنشيط الخلية على الانقسام المستمر بإضافة عوامل النمو growth factors ، ولكن هذه الطريقة لم تكن ذات جده لدى العلماء لأسباب كثيرة. إلى أن توصل العالم د. كري مولس Dr. Kerry Mullis في عام 1985 ( و قد حصل على جائزة نوبل في الكيمياء عام 1993)بنشر اختراعه لتقنية البي سي ار PCR فكانت هذه التقنية بوابة لكثير من التطورات المتسارعة في مجال التكنولوجيا الحيوية ، من أهم الأسباب التي ساعدت هذه التقنية على الانتشار عدم اعتمادها على النظام الحيوي(أي الخلية) و التحكم بكمية الحمض النووي (DNA ) و وسرعة في الإنتاج ولكن كان من عيوب هذه التقنية عدم وجود نظام إصلاح أخطاء الارتباط الخاطئ miss match .

ما هو PCR :

هو تقنية مخبريه تم اكتشافها عام 1983م تقريباً تقوم على إكثار نسخ الحمض النووي (DNA ) خارج النظام الحيوي . أي أنها طريقة لنسخ الحمض النووي في المختبر. و لذلك فهي تقنية حيوية لاستنساخ قطعة من محددة من الحمض النووي و مضاعفة إنتاجها لكي يتسنى إجرى عليه اختبارات و فحوصات إضافية.

ما هي متطلباتPCR :

لتقوم بإنتاج الحمض النووي (DNA ) بواسطة PCR يتتطلب عليك توفير :

1. جهاز للتحكم بدرجات حرارة التفاعل بشمل دقيق و متتالي ( الدورة الحرارية Thermocycle ) : ويقوم هذا الجهاز بتغير درجة الحرارة بشكل سريع ، لآن تغير درجة الحرارة هو الأساس الذي تقوم عليه فكرة هذه التقنية .

2. البليمريز : وهو الإنزيم الذي يقوم ببناء وترتيب القواعد النيتروجينية ( حدات الحمض النووي (DNA ) ) ، ويجب أن يكون هذا الإنزيم مقاوم للحرارة العالية ليتمكن من العمل . و قد اكتشف انزيم مقاوم للحرارة و اسم تاج Tag

3. مجموعة متفرقة من القواعد النيتروجينية: ( A T C G ) ليتمكن الإنزيم من ترتيبها في مواقعها أثناء عملية نسخ الحمض النووي (DNA ) .

4. بريمر Primer : وهو قطعة صغيرة من الحمض النووي (DNA ) ليتمكن الإنزيم من بداء البناء و النسخ عليها .

5. والشيء الأهم هو وجود نسخة من الحمض النووي (DNA ) المراد نسخه .

6. بالإضافة إلى محلول أو وسط ليتم به التفاعل : وهذا المحلول يختلف بين تفاعل و أخر .

عملية النسخ :

بعد وضع الحمض النووي المراد نسخة مع البريمر و و إنزيم البوليمريز و مجموعة مع الأحماض النووية في أنبوب داخل جهاز التحكم الحراري فان هناك 3 مراحل منفصلة تمر بها عملية النسخ:

1. مرحلة التفكيك Denature : رفع الحرارة إلى 94 ْم وذلك لفك الحمض النووي (DNA ) الأصل .

2. مرحلة الالتصاق anneal : إنزال الحرارة إلى ما بين 55-60 ْم ليقوم البريمر بالألتزاق فيزيائياً بواسطة الروابط الهيدروجينية مع الحمض النووي (DNA ) الأصل .

3. مرحلة الامتداد extend : ثم يقوم برفع درجة الحرارة إلى 75 ْم ليقوم البلمريز بعمله في بناء الحمض النووي (DNA ) الجديد .

وهذه المراحل الثلاث تعتبر دورة كاملة وفيها يصبح الحمض النووي (DNA ) الأصل قد تضاعف ، وتعتمد كمية ناتج الحمض النووي (DNA ) على عدد الدورات ( والصورة التالية توضح العملية ) .

لمشاهدة هذه العملية اضغط على هنا.

تطبيقات PCR :

لتقنية PCR تطبيقات كثيرة في مجال أبحاث الحمض النووي (DNA ) و الوراثة ومنها :

1. الكشف عن الطفرات الوراثية : وذلك عن طريق وضع بريمر خاص للطفرة لتكثير الجين الخاص بها . ومنه نقوم بمعرفة المرض إذا كان على زوجين الكروموسومات أو على احدهما ( allele ) .

2. تعين البصمة الوراثية .

3. الكشف عن الفيروسات : وهذه الطريق هي الأدق في تحديد نوع وجنس الفيروس وكميته.

4. هو العنصر الأهم في عملية التجميع الجيني ( Recombinant الحمض النووي (DNA ) ) : حيث نقوم بتكثير الجين المراد إدخاله على البلازمد أو الحمض النووي (DNA ) المضيف .

5. استخدامه في تغير نهايات الجين لتصبح متوافقة مع إنزيمات القطع ( Restriction enzyme ) .

6. هو العملية الأساس في تحديد تتابع القواعد النيتروجينية في الحمض النووي (DNA ) ( الحمض النووي (DNA ) Sequencer ) .

7. معرفة طول الحمض النووي (DNA ) .

8. تقنية الحمض النووي (DNA ) المكمل ( cالحمض النووي (DNA ) ) .

9. تحديد الجين المطلوب من خليط من الجينات .

10. يستخدم في تقنية (microarrays ).

11. في مشروع الخارطة الجينية البشرية (human genome project ) .

12. الساوثرين بلوت (southern plot ) .

13. تقنية ارتباط الحمض النووي (DNA ) – بروتين ( الحمض النووي (DNA ) -Protein Interaction ) .

14. في مجال الطب الشرعي ( اختبار الأمومة ، حالات الاغتصاب ، تحديد الهوية ... الخ ) .

وغيرها من التطبيقات المخبرية والبحثية .

أنواع PCR : هناك نوعان من PCR :

1. PCR العادي : وهو ما تم شرحه والتطرق اليه في الخطوات السابقة .

2. rtPCR : وهو اختصار لـ ( Real Time PCR ) : وهذا النوع يقوم على نفس المبدأ ولكن الخلاف الوحيد يكون مربتط الجهاز بكمبيوتر لتحديد الوقت الحقيقي لبدا التفاعل ومن ثم الكمية الحقيقية لعدد نسخ الحمض النووي (DNA
) ويعتمد ذلك على وجود قواعد نيتروجينية حرة مشعة لتحديد ذلك . مما يسهل على الباحثين الوقت لتحدد وجود الجين المطلوب أو لا ، وكمية الجين بدون الوصول إلى نهاية الدورات الحرارية المحددة .


عدل سابقا من قبل bosy في الأربعاء يونيو 17, 2009 12:21 am عدل 1 مرات

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
توبيك جميل جدا بجد
اولا انا مش بفهم في الاحياء كثير لان دراستي مش تظرقت ليها خالص
بس فهمت حاجات كثير انهارضه
ويا ريت من حضرتك تشرحيلنا بالتفصيل كل تطبيق من تطبيقاته علشان نفهم اكثر
انا نقلت الموضوع لمنتدي علم الاحياء
لاني لقيته الانسب من منتدي الابحاث
شكرا علي مجهودك في المنتدي
ومبروك علينا عضوه نشيطه

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
يااااااااااااااااااه انت قديم اقوي يا هشام

انا بقيت عضوة فعالة

وبعدين يا سيدي اخبرا رديت علي موضوع من مواضيعي

بس بجد شكرا لردك

وشكرا فعلا لانك نقلت الموضوع عندك حق مكانه هنا انسب

وبالنسبة لسؤالك

انا يمكن مش عارفة كل التطبيقات بس ان شاء الله احاول اجبها بالتفصيلونفهمها مع بعض

بس خد تصبيرة

اهم حاجة في تحليل الDNA

انه بستخدم في عد الفيروسات في الجسم

مثلا لو واحد عنده التهاب كبدي وبائي (فيروس سي

يقدر يعرف عدد وكمية الفيروس داخل كبده من التحليل ده

كمان بقي بيستخدم بشكل واسع في اثبات البنوة

عن طريق المقارنة وايجاد التشابه بين الاب والابن في DNA

وانشاء الله استني مني شرح مفصل للموضوع

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
شكرا على الموضوع الرائع والبىسى ار فعلا له استخدامات عديده منها نسبه الفيروسات فى الكبد وله نظريه سهله و منطقيه سوف اذكرها فيما بعد

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
Smile

موضوع رائع يادكتورة بوسى

وان شاء الله نحاول نعرض للتطبيقات دى بالتفصيل

regards

giver

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
شكرا ليكى يا بوسى على المعلومات الجامده دى
Very Happy giver

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz

شكرا ليكى يا دكتورة بوسى على الموضوع المتكامل دا

على الرغم انه بعيد عن مجالى تماما لكن فهمت على قد ما اقدر

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
[ندعوك للتسجيل في المنتدى أو التعريف بنفسك لمعاينة هذا الرابط]_ ليت مي الون_ دومينجادوا _ مانو

اشكركم جدا علي ردودكم
ويارب اقدر افيدكم كده علي طول

descriptionتقنية الPCR Emptyرد: تقنية الPCR

more_horiz
ايون فاكره انا انزيم التاج بوليمريز اللى بيعمل فى درجات الحراراه العاليه
خدت معظم الحاجات دى فى ثانوى بس استفدت جداااااااااااا
انا من عشاااااااااااااااااااق علم الهندسه الوراثيه
ربنا يسهل واجيب تقديرات حلوه واقدر اعمل ماجستير فيه
شكرا د.بوسى جزاكِ الله كل خير
privacy_tip صلاحيات هذا المنتدى:
لاتستطيع الرد على المواضيع في هذا المنتدى
power_settings_newقم بتسجيل الدخول للرد